回答1、獲取目的基因:目的基因可以從基因文庫(kù)中得到,也可以用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增或者化學(xué)的方法去人工合成。2、構(gòu)建基因表達(dá)載體:用限制酶切斷細(xì)胞中的脫氧核糖核酸分子,將細(xì)菌中的質(zhì)粒取出,用連接酶連接并重組脫氧核糖核酸分子和質(zhì)粒。3、目的基因的導(dǎo)入:將目的基因?qū)氲绞荏w細(xì)胞中,包括植物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞和微生物細(xì)胞。4、目的基因的檢測(cè)和鑒定:檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì),鑒定要進(jìn)行抗蟲(chóng)、抗病和活性鑒定。
一、轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉的培育過(guò)程
1、獲取目的基因
目的基因可以從基因文庫(kù)中得到,也可以用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增或者化學(xué)的方法去人工合成?;蛭膸?kù)就是把生物的不同基因的脫氧核糖核酸片段,并導(dǎo)入到受體菌中,使各個(gè)受體菌都含有該生物的不同基因。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增就是在生物體外部復(fù)制特定的脫氧核糖核酸片段,可以由此獲得目的基因。
2、構(gòu)建基因表達(dá)載體
用限制酶切斷細(xì)胞中的脫氧核糖核酸分子,將細(xì)菌中的質(zhì)粒取出,用連接酶連接并重組脫氧核糖核酸分子和質(zhì)粒。
3、目的基因的導(dǎo)入
將目的基因?qū)氲绞荏w細(xì)胞中,常用的受體細(xì)胞中大腸桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等,導(dǎo)入途徑類似細(xì)菌和病毒。要將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞和微生物細(xì)胞,導(dǎo)入到植物細(xì)胞使用的是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法,導(dǎo)入到動(dòng)物細(xì)胞要運(yùn)用顯微注射技術(shù),導(dǎo)入到微生物細(xì)胞要進(jìn)行鈣離子處理。
4、目的基因的檢測(cè)和鑒定
目的基因的檢測(cè)要注意檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的脫氧核糖核酸上是否插入了目的基因,檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了信使核糖核酸,檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)。目的基因的鑒定要進(jìn)行抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定和活性鑒定。
二、轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉的育種原理
轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉分為單價(jià)和雙價(jià),單價(jià)抗蟲(chóng)棉的育種原理是將細(xì)菌來(lái)源的、可以破壞棉鈴蟲(chóng)消化道的基因改造轉(zhuǎn)入到棉花中,讓棉花細(xì)胞中可以存在這種殺蟲(chóng)的消化系統(tǒng),起到抗蟲(chóng)的作用。雙價(jià)抗蟲(chóng)棉的育種原理是將兩種抗蟲(chóng)基因同時(shí)導(dǎo)入到棉花中,兩種基因起到互補(bǔ)的作用,可以增強(qiáng)棉花的抗蟲(chóng)性。